色譜條件:
流動(dòng)相:
1、色譜柱:MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm
流動(dòng)相A: 0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH 6.5):乙睛=93.0:7.0
配制方法:準(zhǔn)確稱取無(wú)水醋酸鈉8.203g于1000mL水中,攪拌均勻,使之溶解,用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.50;準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液930mL和乙腈70mL,混合均勻,抽濾過(guò)0.22µm濾膜;
流動(dòng)相B:水:乙腈=20.0:80.0
配制方法:準(zhǔn)確量取水200mL和乙腈800mL,混合均勻,抽濾過(guò)0.22µm濾膜;
梯度方法:
2. 梯度程序:
流動(dòng)相A: 0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH 6.50):乙睛=93:7
流動(dòng)相B: 水:乙腈=20:80
流速:1.0ml/min
柱 溫:43℃
波 長(zhǎng):254nm
進(jìn)樣量:5μL
3、樣品制備衍生過(guò)程。
精密量取對(duì)照溶液5ml,加入25ml量瓶中,加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯的乙腈溶液2.5ml,1.0mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml,搖勻,室溫放置1小時(shí)后,加入50%乙腈水至刻度,搖勻,取10ml,加正己烷10ml,振搖,放置10分鐘。取下層溶液,過(guò)濾,取續(xù)濾液,即得。
3、色譜圖:
圖1、樣品衍生后
圖2:取樣品溶液1ml加50%乙腈水稀釋1倍。(由于衍生試劑濃度過(guò)大造成樣品測(cè)定過(guò)載,形成峰分叉,樣品稀釋1倍后測(cè)定)